Festékek:
* Olajfestékek: Holbein elsősorban olajfestékeket használt, amelyek lehetővé tették számára, hogy gazdag, élénk színeket és finom árnyalatokat hozzon létre a bőrtónusokban. Precíz és aprólékos ecsetkezeléséről volt ismert, amely figyelemre méltó pontossággal rögzíti a részleteket.
* Tempera: Míg elsősorban olajat használt, Holbein időnként temperát alkalmazott aláfestéshez vagy speciális effektusokhoz. A Tempera, a tojássárgájával kevert pigmenttel készült festék simább, kevésbé fényes felületet tett lehetővé az olajfestékhez képest.
Támogatások:
* Fa panelek: Holbein legtöbb festménye fatáblákra készült. Gondosan előkészítette a paneleket, biztosítva a sima és stabil felületet a festék felhordásához.
* Vászon: Alkalmanként vásznat is használt, főleg nagyobb alkotásokhoz vagy a nyilvános kiállításra szánt munkákhoz.
Egyéb anyagok:
* Aranylevél: Holbein gyakran használt aranylevelet dekorációs elemekhez, hátterekhez vagy ruházathoz, amely egy csipetnyi pazarságot és fényességet adott hozzá.
* Ezüstpont: Az előzetes vázlatokhoz és alárajzolásokhoz Holbein időnként ezüstpontot használt, amely technikát finom vonalakat állított elő az előkészített papíron.
* Tinta: A tintát részletekre, keltetésre, éles vonalak kialakítására, festményein esetenként körvonalakra használta.
* Szén: Faszenet használtak az előzetes vázlatokhoz és az alárajzolásokhoz is.
Konkrét példák a munkájában szereplő anyagokra:
* A követek (1533): Olaj, tölgy panel, arany levél részletekkel.
* VIII. Henrik portréja (1536): Olaj tölgy panelen, ezüstpontos alárajzolással.
* Rotterdami Erasmus portréja (1523): Olaj, tölgy panel, arany levél részletekkel.
Holbein ezeknek az anyagoknak az elsajátítása lehetővé tette számára, hogy élethű és részletes portrékat készítsen, elképesztő pontossággal megörökítve alanyai személyiségét és összetettségét. Olyan innovatív technikákat is alkalmazott, mint a perspektíva és a chiaroscuro (fény és árnyék használata), hogy valósághűséget és mélységet keltsen festményein.