A viszonzatlan szerelem visszatérő témája a darabnak, hiszen több szereplő szerelmes valakibe, aki nem viszonozza a szeretetét. Például Viola szerelmes Orsino hercegbe, aki szerelmes Oliviába. Olivia viszont szerelmes Cesarioba (aki tulajdonképpen Viola álruhában). Ez a viszonzatlan szerelem összetett hálóját hozza létre, amely a darab cselekményének és humorának nagy részét mozgatja.
A téves identitás szintén kulcsfontosságú jellemzője a darabnak. Viola Cesario nevű férfinak álcázza magát, hogy Orsino szolgálatába álljon. Ez az álcázás számos félreértéshez és bonyodalmakhoz vezet, mivel más szereplők összetévesztik Violát egy férfival, és beleszeretnek. A téves identitás Viola számára is lehetőséget teremt a többi szereplő megfigyelésére és kommentálására, ami hozzáadja a darab humorát.
Összességében elmondható, hogy a viszonzatlan szerelem és a téves identitás két kulcsfontosságú jellemző, amelyek hozzájárulnak a Tizenkettedik Éjszaka humorához és összetettségéhez.