A Kirby-Bauer technika egy standard mikrobiológiai módszer, amelyet a baktériumok antimikrobiális szerekkel szembeni érzékenységének meghatározására használnak. Ez magában foglalja a baktériumszaporodás gátlási zónájának mérését az antibiotikummal impregnált korongok körül, amelyeket a teszt organizmussal beoltott agarlemezre helyeztek. Íme a Kirby-Bauer technika általános lépései:
1. Oltóanyag elkészítéset :
- A vizsgált baktériumtörzs tiszta tenyészetét nyerjük, és megfelelő táptalajban tenyésztjük, hogy elérjük a logaritmikus növekedési fázist (turbiditás).
- A baktériumszuszpenziót egy specifikus zavarosságra standardizálják, amely jellemzően 0,5 McFarland turbiditási standardnak felel meg, hogy biztosítsa az állandó oltóanyag-sűrűséget.
2. Az agarlemezbeoltása :
- A vizsgálathoz Mueller-Hinton agart vagy más megfelelő agar táptalajt tartalmazó steril agarlemezeket használnak.
- Steril pamut törlőkendővel a standardizált oltóanyagot egyenletesen eloszlatjuk az agarlemez felületén, így összefolyó gyepet hozunk létre a baktériumok szaporodásának.
- A beoltott lemezt hagyjuk néhány percig száradni, hogy felszívja a felesleges nedvességet.
3. Antibiotikus korongok alkalmazása :
- Az antimikrobiális szereket meghatározott koncentrációjú steril antibiotikum korongokat egyenletesen elosztott időközönként helyezzük az agarlemez felületére steril csipesz vagy korong-adagoló segítségével.
- A korongokat finoman összenyomják, hogy biztosítsák a jó érintkezést az agar felületével anélkül, hogy a korongokat károsítanák.
4. Inkubációt :
- Az antibiotikum korongokkal beoltott lemezt megfelelő hőmérsékleten (általában 35-37°C) meghatározott ideig (általában 16-24 óráig) inkubáljuk, hogy lehetővé tegyük a baktériumok szaporodását és az antimikrobiális szerek diffúzióját.
5. A gátlási zónák méréset :
- Inkubálás után a lemezeket megvizsgáljuk az antibiotikum korongok körüli gátlási zónák jelenlétére.
- Vonalzó vagy digitális tolómérő segítségével az egyes gátlási zónák átmérőjét milliméterben mérjük.
- A zóna átmérője jelzi a vizsgált szervezet érzékenységét az adott antibiotikumra.
6. Eredmények értelmezéset :
- A mért zónaátmérőket szabványos táblázatokkal vagy irányelvekkel hasonlítják össze, például a Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) által biztosítottakkal, hogy meghatározzák a vizsgált szervezet érzékenységét vagy rezisztenciáját a vizsgált antimikrobiális szerekkel szemben.
- Az élőlényeket a gátlási zónák mérete és a megállapított értelmezési kritériumok alapján fogékony, közepes vagy rezisztens kategóriába sorolják.
7. Minőségellenőrzésre :
- A Kirby-Bauer-technika pontosságának és megbízhatóságának biztosítása érdekében minden egyes vizsgálati sorozatban ismert érzékenységi mintákkal rendelkező minőség-ellenőrző törzseket kell beépíteni a módszer és a felhasznált reagensek teljesítményének nyomon követésére.
A Kirby-Bauer antibiotikum-érzékenységi vizsgálatából származó megbízható és klinikailag releváns információk megszerzése érdekében fontos szabványos eljárásokat követni és az eredményeket a megállapított irányelvek szerint értelmezni.