A "Ne aludj többet!" több réteg jelentőséggel bír a darabban. Egyrészt egyszerűen Macbeth parancsa az egész háztartásnak, hogy maradjanak ébren és legyenek éberek, mert attól tart, hogy valami elromlott. A sor azonban mélyebb jelentéseket is hordoz, és előrevetíti az elkövetkező eseményeket.
Először is a "Ne aludj többet!" az ártatlanság elvesztésének és Macbeth sötétségbe süllyedésének a metaforájának tekinthető. A darab eddigi pontjáig Macbeth lelkiismeretével küszködött, és megbánást tanúsított tettei miatt. A „Ne aludj többet!” sor kimondásával azonban gyakorlatilag száműzi az alvást, és ezzel minden esélyt a megváltásra. Ez a vonal fordulópontot jelent Macbeth karakterében, és szimbolizálja a gonosz ölelését.
Másodszor a "Ne aludj többet!" egy erőteljes átok, amelyet Macbeth önmagára és az egész háztartásra vet. Azzal, hogy Macbeth megtagadja önmagától és a többiektől az alvás képességét, állandó nyugtalanságot és szorongást kelt. Az alvás gyakran a békével, a helyreállítással és a tudatalattival társul, és azáltal, hogy megfosztja magát ettől, Macbeth megteremti a terepet az ezután következő mentális és érzelmi zűrzavarhoz. A kifejezés tehát azt sugallja, hogy nem lesz enyhülés a Macbeth által átélt bűntudat, félelem és paranoia ellen.
Harmadszor a "Ne aludj többet!" előrevetíti azt a nyugtalanító alvajárási epizódot, amelyet Lady Macbeth a darab későbbi részében fog átélni. Ahogy Macbethet egyre jobban felemészti a bűntudata, Lady Macbeth alvajárástól és rémálmoktól kezd szenvedni, amelyek során folyamatosan ismételgeti a "Ki, átkozott hely!" (5. felvonás, 1. jelenet). Ez a sor bizonyos értelemben Macbeth korábbi parancsát visszhangozza, hangsúlyozva a párat sújtó álmatlanságot és lelki gyötrelmet.
Befejezésül a "Ne aludj többet!" döntő pillanat a Macbethben, amely azt jelzi, hogy Macbeth könyörtelen és bűntudatos egyénvé változik. Ez az ártatlanság elvesztésének metaforája, egy erőteljes átok, és a Macbethre és a körülötte lévőkre váró jövőbeli csapások előjele.