A Macbeth című darabban Lady Macbeth döntő szerepet játszik Duncan király halálában. Ő az, aki meggyőzi Macbethet, hogy ölje meg a királyt, és segít neki megtervezni és végrehajtani a tettet.
Miután Macbeth kétségeit és félelmét fejezi ki a király meggyilkolásával kapcsolatban, Lady Macbeth rácáfolja, hogy gyáva volt, és megszégyeníti a bűncselekmény elkövetésével. Rámutat, hogy már felmerült benne az ötlet, hogy megölje Duncant, és csak habozik "gyenge természete" miatt. Arra is emlékezteti, hogy király legyen, és azt mondja neki, hogy könyörtelennek kell lennie, ha el akarja érni céljait.
Lady Macbeth elszántsága és manipulációja végül meggyőzi Macbethet, hogy egyetértsen a tervével. Elmondja a gyilkosság részleteit, beleértve azt is, hogyan és mikor kell megtenni. Azt is mondja Macbethnek, hogy hagyja Duncan teste mellett a véres tőröket, hogy a király őreire háruljon a felelősség.
A gyilkosság elkövetése után Lady Macbeth kezdetben abban bízik, hogy sikerül eltitkolniuk. Hamarosan azonban a bűntudat és az őrület jeleit kezdik mutatni. Megszállottja lesz a vérnek a kezében, és nem tud aludni. Elkezdi látomásai is Duncan szelleméről, aki gyilkossággal vádolja őt.
Lady Macbeth bűntudata végül túlságosan elviselhetetlenné válik. A darab negyedik felvonásában hal meg, halála pedig fordulópont Macbeth számára. Még könyörtelenebbé és zsarnokibbá válik, és végül elveszíti az eszét.
Lady Macbeth szerepe Duncan király halálában azért jelentős, mert rávilágít az ambíció erejére és annak veszélyeire, ha hagyjuk, hogy az ember vágyai legyőzzék erkölcsi alapelveit. Bonyolult és tragikus karakter, akit végül saját becsvágya és bűntudata pusztít el.